小菜蛾普通氣味結合蛋白2基因的原核表達與多克隆抗體制備

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摘要:環境昆蟲學報JournalofEnvironmentalEntomology,June2010,32(2):194-198ISSN16740858do:i103969/jissn1674-0858201002008小菜蛾普通氣味結合蛋白2基因的原核表達與多克隆抗體制備徐紅星,陳東旭,張雅林,王敦(西北農林科技大學植保資源與利用教育部重點實驗室,陜西楊凌712100)摘要:本實驗提取羽化3d的小菜蛾Plutellaxylostella成蟲觸角總RNA,反轉錄合成cDNA,以此為模板PCR擴增出小菜蛾普通氣味結合蛋白2基因,大小為492bp,Blast結果顯示與多種昆蟲的GOBP2具有較高的同源性。將該基因克隆到表達載體pMAL-c4E中,轉化宿主菌TB1(DE3),獲得單克隆重組質粒pMAL-c4E-GOBP2。IPTG成功誘導pMAL-c4E-GOBP2表達出約60kDa的融合蛋白。優化誘導條件為3mmol/L終濃度IPTG、6h,可獲得大量可溶性蛋白。表達的融合蛋白通過親和色譜法純化、免疫新西蘭大白兔制備多克隆抗體。ELISA分析表明制備的抗體效價達11.28105。關鍵詞:小菜蛾;GOBP2;原核表達;多克隆抗體中圖分類號:Q966文獻標識碼:A文章編號:16740858(2010)01019405Cloning,prokaryoticexpressionandpolyclonalantibodypreparationofPlutellaxylostellageneralodorantbindingprotein2(GOBP2)geneXUHon

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